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層析柱的操作方法
以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例:
1.吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤置于烘箱中,于105。c活化2h后,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿整個柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計量溶劑泵按一(5:95)比例泵入溶劑,至溶劑流出止。
2.上樣
將冬凌草的-提取物400g用適量溶解,泵入中壓柱柱頭,然后泵入1000rid。
3.洗脫
以一定比例的一為洗脫液,60ml/min的流速進行梯度洗脫,柱的使用壓力為2~ 3kg/c 。按每份500ml收集,tlc檢識展開劑一(2:8),廊坊大孔樹脂柱,顯色劑5%香草醛-液
至洗脫完全,相同流份合并,回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加入適量熱溶后自然放置,析出結(jié)晶,為冬凌草甲素。
樹脂未使用狀態(tài)下的儲存
樹脂的內(nèi)、外包裝可有效保護樹脂免受污染、損失與水分流失,如果樹脂包裝破損或敞開,一方面可能導致樹脂外漏受污,且散落的樹脂顆粒會導致地面易滑,帶來樹脂損失的同時,也會給現(xiàn)場人員的安全帶來-(存在滑倒跌落風險);另一方面,樹脂長期暴露于空氣中,不但存在樹脂發(fā)生物理、化學、生物污染而變質(zhì)的可能,也會導致樹脂表面與內(nèi)部水汽蒸發(fā),引起樹脂失水,影響樹脂性能的風險。因此,無論何種樹脂,一旦打開包裝,應盡快投入使用;未使用的樹脂應重新封裝保存(可使用原有包裝,但須注意包裝完好與潔凈)。樹脂儲存過程中一旦發(fā)現(xiàn)包裝破損,大孔樹脂柱規(guī)格,應及時進行包裝修補或倒換包裝。
需要-注意的是,一旦發(fā)現(xiàn)樹脂因失水而變得干燥,切不可直接用水進行潤濕,以免樹脂快速溶脹而導致骨架斷裂,產(chǎn)生樹脂破碎。而是應該向樹脂中慢慢加入濃鹽水,靜置1小時以上,以使樹脂內(nèi)、外溶液體系達到平衡,再通過連續(xù)處理的方式逐步降低鹽水濃度,實現(xiàn)鹽水的置換,后再用純水清洗干凈。對于干燥程度較高的樹脂,建議可在實驗室-行包括鹽水濃度、加入速度、平衡時間等工藝參數(shù)的優(yōu)化論證,確定工藝后再進行規(guī);幚怼
層析柱的操作方法
以中壓柱層析法提取分離冬凌草甲素為例:
1.吸附劑的處理及柱子裝填
將一定量薄層層析硅膠裝入搪瓷盤置于烘箱中,于105。c活化2h后,取出放置室溫即可裝柱。柱子采用干法填充,填滿整個柱體,不留死體積,密封后用柱塞式計量溶劑泵按一(5:95)比例泵入溶劑,至溶劑流出止。
2.上樣
將冬凌草的-提取物400g用適量溶解,泵入中壓柱柱頭,然后泵入1000rid。
3.洗脫
以一定比例的一為洗脫液,60ml/min的流速進行梯度洗脫,柱的使用壓力為2~ 3kg/c 。按每份500ml收集,tlc檢識展開劑一(2:8),顯色劑5%香草醛-液
至洗脫完全,相同流份合并,回收溶劑。將冬凌草甲素流份合并蒸干。加入適量熱溶后自然放置,析出結(jié)晶,為冬凌草甲素。
4.層析柱再生、平衡
有效成分經(jīng)tlc檢識全部流出后,用純5000ml再生,一(5:95)平衡后,大孔樹脂柱廠家,可再次上樣,反復使用(使用次數(shù)隨原料不同而異,一般可連續(xù)使用2—6個月以上)。
5.重結(jié)晶
冬凌草甲素結(jié)晶析出完全后,減壓過濾,然后用少量洗滌(洗滌液保留,作下次熱溶冬凌草甲素用)。將冬凌草甲素再用適量熱溶后放置,結(jié)晶再次析出,待結(jié)晶完全后,抽濾,用少量洗滌,將結(jié)晶室溫下晾干后置真空干燥箱中,35度真空干燥至恒重。密封于瓶中,置干燥器中保存。
6.薄層層析分析
取適量冬凌草甲素對照品及由上述方法得到的冬凌草甲素樣品溶解后點于同一硅膠g薄層板上,以一(8:2)為展開劑進行展開,5% 香草醛-液顯色,大孔樹脂柱供應,于105。c烘至斑點清晰。表明在該展開系統(tǒng)下,冬凌草甲素樣品和對照品都具有相同的rf值,并呈現(xiàn)出同樣的藍綠點,在制備的冬凌草甲素樣品中,沒有雜質(zhì)斑痕。
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