重慶pcr-南京英瀚斯生物科技-熒光定量pcr

emsa實(shí)驗(yàn)

emsa:凝膠遷移或電泳遷移率檢測是一種檢測蛋白質(zhì)和dna序列相結(jié)合的技術(shù)，初用于研究dna結(jié)合蛋白和其相關(guān)的dna結(jié)合序列相互作用，可用于定性和定量分析。分為2種類型：同位素標(biāo)記探針，非同位素標(biāo)記探針。

通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32p同位素標(biāo)記的dna或rna探針一同保溫，在非變性的聚bing烯凝膠電泳上，分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。dna-復(fù)合物或rna-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動(dòng)得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的dna結(jié)合蛋白，可用純化蛋白，部分純化蛋白，重慶pcr，或核細(xì)胞抽提液。在檢測rna結(jié)合蛋白時(shí)，依據(jù)目的rna結(jié)合蛋白的位置，-，可用純化或部分純化的蛋白，也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競爭實(shí)驗(yàn)中采用含蛋白結(jié)合序列的dna或rn片duan和gua核苷酸片段（特異），-多少錢，和其它非相關(guān)的片段（非特異），來確定dna或rna結(jié)合蛋白的特-。在競爭的特異和非特異片段的存在下，依據(jù)復(fù)合物的特點(diǎn)和強(qiáng)度來確定特異結(jié)合。

染色質(zhì)免l疫共沉淀技術(shù)(chip)

基于體內(nèi)分析而發(fā)展的染色質(zhì)免l疫沉淀分析chr omat in immunoprecipitat ionassay kit， chip)技術(shù)可以真實(shí)、完整地反映結(jié)合在dna序列上的調(diào)控蛋白。由于chip采用甲醛固定活l細(xì)胞或者組織的方法，因此能比較真實(shí)的反映細(xì)胞內(nèi)tf與promoter的結(jié)合情況，還可以用來研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。近年來，這種技術(shù)得到不斷的發(fā)展和完善。采用結(jié)合微陣列技術(shù)在染色體基因表達(dá)調(diào)控區(qū)域檢查染色體活性，是深入分析癌l癥、心血l管病以及中央神經(jīng)系統(tǒng)紊亂等-主要通路的一-種非常有效的工具。

染色質(zhì)免l疫沉淀分析(chip) 的基本原理是在活l細(xì)胞狀態(tài)下，當(dāng)用甲醛處理時(shí)，相互靠近的蛋白與蛋白、蛋白與-(dna或rna)之間會(huì)產(chǎn)生共價(jià)鍵。細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)f與promoter相互結(jié)合時(shí)，它們必然靠的比較近或者契合在一起，這個(gè)時(shí)候用甲醛處理，熒光定量pcr，能使它們之間產(chǎn)生共價(jià)鍵。固定的蛋白質(zhì)dna復(fù)合物通過超聲或酶處理將其隨機(jī)切斷為-定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段然后通過抗原抗l體的特-識(shí)別反應(yīng)沉淀此復(fù)合體，特-地富集目的蛋白結(jié)合的dnal片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與dna相互作用的信息。通過qpcr或二代測序，篩選與目的蛋白互作的未知dna信息。