active rac-武漢紐斯特

1. vasp通過調(diào)節(jié)rab11依賴性tgf-β受體的質(zhì)膜靶向來促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的tgf-β活化

    肝l病學(xué)第61卷，首1期，第361-374頁，2015年1月

2. rab5活性調(diào)節(jié)glut4分類為-反應(yīng)性和非-反應(yīng)性內(nèi)體室：-抵抗發(fā)展的潛在機(jī)制。

    內(nèi)分l泌學(xué)。 2014年9月; 155（9）：3315-28

將裂解液轉(zhuǎn)移到適當(dāng)大小的試管中，并置于冰上。

如果發(fā)生核裂解，則細(xì)胞裂解液可能變得非常粘稠，難以移液。 如果發(fā)生這種情況，可將裂解液通過27?號(hào)注射l器針頭3-4次以剪切基因組dna。

通過離心10分鐘（在4°c下為12，000 x g）清除裂解物。

收集上清液并將樣品保存在冰上以備立即使用，或速凍并保存在-70°c以便將來使用。

試劑準(zhǔn)備

?1x測(cè)定/裂解緩沖液：短暫混合5x儲(chǔ)備液，并在去離子水中稀釋至1x。 在使用前，添加蛋白酶抑制l劑，例如1 mm pmsf，10 μg / ml亮肽素和10 μg / ml抑肽酶。

1.將細(xì)胞（一塊10厘米長(zhǎng)的平板，約107個(gè)細(xì)胞）培養(yǎng)至約80-90％匯合。根據(jù)需要用活化劑或抑制l劑-細(xì)胞。

2.吸出培養(yǎng)基，并用冰冷的pbs洗滌兩次。

3.完全除去pbs洗滌液，然后向細(xì)胞中加入冰冷的1x分析/裂解緩沖液（每10 cm組織培養(yǎng)板0.5-1 ml）。

4.將培養(yǎng)板放在冰上10-20分鐘。

5.用刮板將其從平板上取下。

6.將裂解物轉(zhuǎn)移至適當(dāng)大小的試管中，并置于冰上。

7.如果發(fā)生核裂解，則細(xì)胞裂解液可能變得非常粘稠，難以移液。如果發(fā)生這種情況，可將裂解液通過27?號(hào)注l射器針頭3-4次以剪切基因組dna。

8.通過離心10分鐘（在4°c下為12，000 x g）清除裂解物。

9.收集上清液并將樣品（約1-2 mg的總蛋白）存儲(chǔ)在冰上以立即使用，或速凍并存儲(chǔ)在-70°c以便將來使用。