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原位雜交雜交液注意事項:
(1)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標記探針外,還含有較高濃度的鹽類、-胺、-葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體dna或rna等。
(2)雜交液中含有較高濃度的na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標本之間的靜電結(jié)合。-胺可使tm降低,雜交液中含每1%的-胺可分別使rna:rna,rna:dna,dna:dna的雜交溫度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以雜交液中加入適量的-胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標本的脫落。-葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達到提高雜交率的目的(尤其對雙鏈-探針)。
在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體dna或rna等,都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特-結(jié)合,以減低背景。
原位雜交試驗
收集斑馬魚的胚胎,在holfretor水中培養(yǎng),到達所需要的發(fā)育時期時,用蛋白酶去除卵膜,用4%-固定,在4℃保存,分子病理技術(shù)服務(wù),二十四小時后用50%2%-溶液洗,然后換成,在-20c 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用處理,去除色素;蛘呤褂-锍脲稀溶液培養(yǎng),可阻斷色素的形成) 武漢科銳諾生物科技有限公司
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