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(4)需用特殊方法制備供試液的供試品
膜劑供試品 取供試品,剪碎,加ph7.0無菌--蛋白胨緩沖液,或ph7.2磷酸鹽緩沖液,或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基,浸泡,振搖,制成1:10的供試液。若需要,微生物限度檢測,調(diào)節(jié)供試液ph值至6~8。-時(shí),用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。
腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品 取供試品,加入ph6.8無菌磷酸鹽緩沖液(用于腸溶制劑)或ph7.6 無菌磷酸鹽緩沖液(用于結(jié)腸溶制劑),置45℃水浴中,振搖,使溶解,制成1:10的供試液。-時(shí),空氣微生物檢測,用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。
氣霧劑、-供試品 取供試品,置-20℃或其他適宜溫度冷凍約1小時(shí),取出,迅速消毒供試品開啟部位,用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔,放至室溫,并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)容器,使拋射劑緩緩全部釋出。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。用無菌zhu射器從每一容器中吸出藥液于無菌容器中混合,然后取樣檢查。
貼膏劑供試品 取供試品,去掉防粘層,將粘貼面朝上放置在無菌玻璃或塑料器皿上,在粘貼面上覆蓋一層適宜的無菌多孔材料(如無菌紗布),避免貼膏劑粘貼在一起。將處理后的貼膏劑放入盛有適宜體積并含有表面活性劑(如聚山梨酯80或卵磷脂)稀釋液的容器中,振蕩至少30分鐘。-時(shí),用同一稀釋液將供試液進(jìn)一步10倍系列稀釋。
(2)薄膜過濾法 薄膜過濾法所采用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45μm,直徑一般為50mm,若采用其他直徑的濾膜,沖洗量應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整。供試品及其溶劑應(yīng)不影響濾膜材質(zhì)對微生物的截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí),應(yīng)-濾膜在過濾前后的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品,環(huán)境微生物檢測,其濾膜和濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的da過濾效率,應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量一般為100ml?倹_洗量不得超過1000ml,以避免濾膜上的微生物受損傷。
取照上述“供試液的制備” “接種和稀釋” 和“抗jun活性的去除或滅活” 制備的供試液適量(一般取相當(dāng)于1g、1ml或10c㎡的供試品,若供試品中所含的菌數(shù)較多時(shí),供試液可酌情減量),加至適量的稀釋液中,混勻,過濾。用適量的沖洗液沖洗濾膜。
若測定需氧菌總數(shù),轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板上;若測定霉菌和酵母總數(shù),轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏-瓊脂培養(yǎng)基平板上。按表1規(guī)定條件培養(yǎng)、計(jì)數(shù)。每株試驗(yàn)菌每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。同法測定供試品對照組及菌液對照組菌數(shù)。
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